細胞培養(yǎng)是一種在人工控制條件下,使細胞在體外生存并增殖的技術(shù)。它對于基礎(chǔ)生物學研究、藥物開發(fā)、再生醫(yī)學和診斷等域至關(guān)重要。以下睿創(chuàng)生物淺談細胞培養(yǎng)步驟概述:

一、準備工作

* 清潔和消毒所有工作臺面、工具和培養(yǎng)容器,通常使用70%酒精擦拭。

* 穿戴適當?shù)膶嶒炇曳雷o裝備,如實驗服、套和口罩。

二、培養(yǎng)基的制備

* 根據(jù)所需細胞類型,配制適宜的培養(yǎng)基,這通常包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、抗生素和其他生長因子。

* 確保所有培養(yǎng)基成分均為無菌, 并在37°C、5% CO?的恒溫箱中預(yù)熱。

三、細胞傳代

* 從現(xiàn)有細胞培養(yǎng)中取出一部分細胞,通常使用胰蛋白酶-EDTA溶液消化細胞。

* 將消化后的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中,加入適量的培養(yǎng)基,以稀釋細胞并促進其生長。

四、培養(yǎng)細胞

* 將含有細胞的培養(yǎng)瓶放入恒溫箱中,維持適宜的溫度、濕度和CO?濃度。

* 定期觀察細胞生長情況,使用倒置顯微鏡檢查細胞形態(tài)和密度。

五、細胞收獲

* 當細胞達到適當?shù)纳L密度時,再次使用胰蛋白酶EDTA溶液消化細胞。

* 收集細胞懸液,并通過離心分離細胞。

六、細胞計數(shù)和種植

* 使用細胞計數(shù)板或自動細胞計數(shù)器計算細胞數(shù)量。

* 根據(jù)實驗需要,將細胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

七、細胞凍存

* 如果需要長期保存細胞,可以在細胞生長至對數(shù)生長期時進行凍存。

* 將細胞與凍存保護劑混合,緩慢冷卻至-80°C ,然后轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。

八、質(zhì)量控制

-定期進行細胞株的鑒定,以確保其身份和純度。

檢測細胞培養(yǎng)中的微生物污染,如細菌、真菌和病毒。

九、廢棄物處理

* 所有使用過的培養(yǎng)基、細胞懸液和其他廢棄物都應(yīng)按照生物危險廢物處理規(guī)定進行處置。

請注意,這些步驟是通用的,并可能需要根據(jù)特定細胞類型、實驗?zāi)康暮蛯嶒炇覘l件進行調(diào)整。在進行細胞培養(yǎng)時,應(yīng)嚴格遵守無菌操作規(guī)程,以避免污染。此外,對于特定的細胞類型,可能還需要額外的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基配方。