ELISA試劑盒檢測常用方法及順序

ELISA，即“酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)"，是一種常用的生物分析技術(shù)，通過檢測樣品中特定蛋白質(zhì)的含量，來幫助研究人員在生命科學(xué)中開展多種實(shí)驗(yàn)。然而，要完成ELISA實(shí)驗(yàn)需要用到一整套試劑盒，其中常用的試劑盒種類有很多。本文將從試劑盒的分類、用途、常用步驟、質(zhì)量控制4個(gè)方面，詳細(xì)介紹在科研實(shí)驗(yàn)中常使用的ELISA試劑盒。

一、試劑盒的分類

根據(jù)檢測原理不同，ELISA試劑盒可分為直接ELISA試劑盒、間接ELISA試劑盒、夾心ELISA試劑盒、競爭ELISA試劑盒、免疫層析試劑盒、光學(xué)顯微鏡試劑盒等多種。其中，直接ELISA試劑盒是最jian便的一種，也是最早應(yīng)用的一種；夾心ELISA試劑盒則是目前應(yīng)用zui廣fan的類型，采用夾心法可以很精確地定量測定某種蛋白質(zhì)的含量；競爭ELISA試劑盒用來測定低濃度的多肽激素和抗體，具有更高的靈敏度。在選擇試劑盒時(shí)需要了解其適用范圍、檢測靈敏度和穩(wěn)定性等指標(biāo)，確定是否符合實(shí)驗(yàn)的需要。

二、試劑盒的用途

ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā)、食品安全、環(huán)境保護(hù)等多個(gè)領(lǐng)域。例如，在生命科學(xué)領(lǐng)域中，科研人員可以利用它來測定某種蛋白質(zhì)的含量、研究免疫系統(tǒng)和感染病毒的機(jī)制。在醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域中，ELISA試劑盒常被用于檢測血清中腫瘤標(biāo)志物的含量。在食品安全領(lǐng)域中，ELISA試劑盒可用來檢測食品中的殘留物和污染物等。

三、ELISA試劑盒的常用順序

1.涂覆

首先，將特定抗原涂覆在微孔板表面，一般選擇質(zhì)地緊密、透亮、表面光潔的微孔板。抗原的含量、涂覆時(shí)間和溫度都會(huì)影響檢測結(jié)果。

2.阻斷

涂覆后的微孔板表面還有空隙，容易發(fā)生非特異性吸附，從而影響檢測結(jié)果。因此，需要在涂覆過程中加入較低濃度的牛血清蛋白（BSA）、明膠等蛋白，阻塞未被試劑占據(jù)的空位。

3.樣品加入

加入待測試的樣品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。若是多個(gè)樣品，需分別在不同的孔板中加入。

4.加入檢測抗體

加入特異性檢測抗體，可與樣品中特定蛋白質(zhì)結(jié)合。

5.加入二抗及底物

加入二抗和顯色底物，可以將檢測抗體和樣品中的目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，產(chǎn)生一定的信號(hào)，如顏色。

6.結(jié)果判讀

通過光譜分析或比色法測量各孔位色素的吸收率或發(fā)光強(qiáng)度，從而計(jì)算出樣品中含有的目標(biāo)蛋白質(zhì)含量。

四、質(zhì)量控制

ELISA試劑盒在使用過程中應(yīng)該注意質(zhì)量控制。比如，在樣品和試劑的制備中要求熟練掌握各種實(shí)驗(yàn)技巧，保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性；在檢測過程中，要按程序和結(jié)果質(zhì)量要求執(zhí)行實(shí)驗(yàn)，符合實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范。同時(shí)，在使用過程中嚴(yán)格控制卡扣、儲(chǔ)存試劑、保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境等方面也要注意給予齊全的保障，避免實(shí)驗(yàn)過程中的誤差干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

綜上所述，ELISA試劑盒是生物分析技術(shù)的重要代表，其分類和用途各有側(cè)重，在實(shí)驗(yàn)過程中掌握常用步驟和質(zhì)量控制，可以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為科研人員的實(shí)驗(yàn)研究提供重要幫助。